等電聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期問世的一種利用有pH梯度的介質(zhì)(起決定作用的物質(zhì))分離等電點不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。黑色電泳進(jìn)行一些表面的處理，是鏟除涂膜和涂件外表的阻止，清掃影響這兩個聯(lián)絡(luò)的要素，所以黑色電泳加工就是專門針對黑色電泳進(jìn)行加工。電泳廠家又名—— 電著（著），泳漆，電沉積。創(chuàng)始于二十世紀(jì)六十年代，由福特汽車公司*先應(yīng)用于汽車底漆。黑色電泳隨著汽車工業(yè)的發(fā)展，先進(jìn)的汽車涂裝特別是轎車涂裝技術(shù)和設(shè)備在我國得以快速應(yīng)用。目前，在我國安裝的涂裝設(shè)備的水平已經(jīng)有了很大進(jìn)步，今后隨著水性漆及粉末涂料等環(huán)保涂料的使用，我國的涂裝技術(shù)水平將整體達(dá)到世界先進(jìn)水平。由于其分辨率可達(dá)0.01pH單位(unit)，因此特別適合于分離分子量相近而等電點不同的蛋白質(zhì)組分。⒈IEF的基本原理 在IEF的電泳中，具有pH梯度的介質(zhì)其分布是從陽極（anode）到陰極（cathode ），氫離子濃度指數(shù)逐漸增大。如前所述，蛋白質(zhì)分子具有兩性解離及等電點的特征，這樣在堿性區(qū)域蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷(electric charge)向陽極移動，直至某一pH位點時失去電荷而停止移動，此處介質(zhì)的pH恰好等于聚焦蛋白質(zhì)分子的等電點（pl）。同理，位于酸性區(qū)域的蛋白質(zhì)分子帶正電荷向陰極移動，直到它們的等電點上聚焦為止?？梢娫谠摲椒ㄖ?，等電點是蛋白質(zhì)組分的特性量度，將等電點不同的蛋白質(zhì)混合物加入有pH梯度的凝膠介質(zhì)中，在電場內(nèi)經(jīng)過一定時間后，各組分將分別聚焦在各自等電點相應(yīng)的pH位置（position )上，形成分離的蛋白質(zhì)區(qū)帶。⒉pH梯度的組成 pH梯度的組成方式方法有二種，一種是人工pH梯度，由于其不穩(wěn)定（解釋:穩(wěn)固安定；沒有變動)，重復(fù)（repeat)性差，現(xiàn)已不再使用。另一種是天然pH梯度。天然pH梯度的建立是在水平板或電泳管正負(fù)極間引入等電點彼此接近的一系列兩性電解質(zhì)(屬性：化合物)的混合物，在正極端吸入酸液，如硫（化學(xué)符號：S）酸（化學(xué)式：H2SO4）、磷酸或醋酸等，在負(fù)極端引入堿液，如氫氧(Oxygen)化（oxidation)鈉、氨（化學(xué)式：NH3） 水等。電泳開始前兩性電解質(zhì)的混合物pH為一均值，即各段介質(zhì)中的pH相等，用pH0表示。電泳開始后，混合物中pH*低的分子，帶負(fù)電荷*多，pI1為其等電點，向正極移動速度*快，當(dāng)移動到正極附近的酸液界面時，pH突然下降，甚至接近或稍低于PI1，這一分子不再向前移動而停留在此區(qū)域內(nèi)。由于兩性電解質(zhì)具有一定的緩沖能力，使其周圍一定的區(qū)域內(nèi)介質(zhì)的pH保持在它的等電點范圍(fàn wéi)。pH稍高的第二種兩性電解質(zhì)，其等電點為pI2，也移向正極，由于pI2＞pI1，因此定位于*種兩性電解質(zhì)之后，這樣，經(jīng)過一定時間后，具有不同等電點的兩性電解質(zhì)按各自的等電點依次排列，形成了從正極到負(fù)極等電點遞增，由低到高的線性pH梯度，如圖16-3所示。⒊兩性電解質(zhì)載體與支持介質(zhì) 理想的兩性電解質(zhì)載體應(yīng)在pI處有足夠的緩沖能力及電導(dǎo)，前者保證pH梯度的穩(wěn)定，后者允許一定的電流(Electron flow)通過。不同pI的兩性電解質(zhì)應(yīng)有相似的電導(dǎo)系數(shù)從而使整個體系的電導(dǎo)均勻（jūn yún)。兩性電解質(zhì)的分子量要小，易于應(yīng)用分子篩或透析方法將其與被分離的高分子物質(zhì)分開，而且不應(yīng)與被分離物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)或使之變性。常用的pH梯度支持介質(zhì)有聚丙烯酰胺(acylamide)凝膠、瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠等，其中聚丙烯酰胺凝膠為*常應(yīng)用。電泳后，不可用染色劑直接染色，因為常用的蛋白質(zhì)染色劑也能和兩性電解質(zhì)結(jié)合，因此應(yīng)先將凝膠浸泡在5％的三氯醋酸中去除兩性電解質(zhì)，然后再以適當(dāng)?shù)姆椒ㄈ旧?

　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　

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